1. 個(gè)性化靶向新生抗原自體免疫 T 細(xì)胞注射液（Neo-T 注射液）
項(xiàng)目背景信息及優(yōu)勢(shì)
1. 什么是新生抗原（Neoantigen）？
由腫瘤細(xì)胞基因突變所產(chǎn)生，能被免疫細(xì)胞所識(shí)別并能激活免疫系統(tǒng)的異常蛋白質(zhì)就是 Neoantigen（新生抗原）。
2. Neoantigen 兩個(gè)重大的特點(diǎn)：
1）腫瘤細(xì)胞特有，正常細(xì)胞沒(méi)有，所以稱為“新生”，或者也有學(xué)者建議翻譯成“癌 生”。
2）一個(gè)腫瘤細(xì)胞所攜帶的基因突變可能是成百上千個(gè)，所產(chǎn)生的異常蛋白也可能是數(shù)十甚至數(shù)百個(gè)，但是并不是所有的異常蛋白都能激活免疫系統(tǒng)，只有那些能激活免疫系統(tǒng)的，才能被稱之為“抗原”。
3. 相比于常規(guī)治療方法，基于 Neoantigen 的 Neo-T 注射液的獨(dú)有優(yōu)勢(shì)：
1）特異性強(qiáng)、副反應(yīng)低。Neo-T 注射液靶向的 Neoantigen 是腫瘤所獨(dú)有的，免疫原性比癌-睪丸抗原等其它腫瘤相關(guān)抗原更強(qiáng)；同時(shí) neoantigen 是腫瘤特異性標(biāo)識(shí)，不出現(xiàn)在體內(nèi)的其他器官上，靶向 Neoantigen 的 Neo-T 注射液在強(qiáng)效抗腫瘤的同時(shí)，不會(huì)引起重要器官如心、肝、肺等的致命性毒性，也就避免了免疫相關(guān)不良反應(yīng)的發(fā)生。在 Neo-T 注射液早期的探索性臨床試驗(yàn)中沒(méi)有出現(xiàn) 3~4 級(jí)的嚴(yán)重不良反應(yīng)，2 級(jí)不良反應(yīng)也只出現(xiàn)了 3 次。目前的免疫治療，無(wú)論是 PD-1 抗體還是 CAR-T，都比較容易發(fā)生免疫相關(guān)的副作用，究其原因在于它們所針對(duì)的靶點(diǎn)并不是腫瘤所獨(dú)有的。比如，腫瘤細(xì)胞會(huì)通過(guò) PD-1 和其受體 PD-L1 的結(jié)合來(lái)逃避免疫系統(tǒng)的清除，心臟、肺、腎臟等器官也可通過(guò)這個(gè)分子機(jī)制來(lái)避免免疫損傷，一旦 PD1 抗體阻斷結(jié)合，腫瘤細(xì)胞被清除的同時(shí)，其他器官也可能同時(shí)出現(xiàn)免疫損傷。而 CAR-T 常用的幾個(gè)靶點(diǎn)，靶向 CD19 會(huì)導(dǎo)致 B 細(xì)胞缺乏，靶向癌胚抗原（CEA）會(huì)導(dǎo)致腸炎和腹瀉，靶向 HER2 可能誘發(fā)心衰等等。
2）靶向性強(qiáng)、有效率高。Neo-T 注射液可同時(shí)靶向腫瘤多種新生抗原，一方面可克服腫瘤的異質(zhì)性，另一方面也讓腫瘤難以產(chǎn)生耐藥性。在 Neo-T 注射液早期的探索性臨床試驗(yàn)中，8 位晚期實(shí)體瘤患者接受了 Neo-T 注射液治療，其中 2 人評(píng)估部分緩解（PR），3 人疾病穩(wěn)定（SD），3 人疾病進(jìn)展，疾病控制率達(dá) 62.5%，2 例緩解受試者 PFS 分別為 10.5 個(gè)月和 15 個(gè)月。而 CAR-T 注射液的單靶點(diǎn)治療，腫瘤細(xì)胞容易通過(guò)突變逃避 CAR-T 的殺傷，造成耐藥。比如 CAR-T 治療 CD19 陽(yáng)性的急性淋巴細(xì)胞白血病，有效率超過(guò) 80%，但約有一半的病例會(huì)在一年內(nèi)復(fù)發(fā)。
4. Neo-T 注射液是如何生產(chǎn)制備進(jìn)而實(shí)施給藥治療的呢？
1）個(gè)性化腫瘤新生抗原的篩選鑒定；
2）體外制備出靶向腫瘤新生抗原的 Neo-T 細(xì)胞，再回輸患者體內(nèi)。其中，篩選鑒定個(gè)性化腫瘤新抗原是決定治療成敗的關(guān)鍵，需要通過(guò)比較精細(xì)嚴(yán)密的生
物信息學(xué)技術(shù)來(lái)完成，主要包括以下 3 個(gè)步驟：
1）腫瘤基因組測(cè)序獲得突變位點(diǎn)：針對(duì)患者的腫瘤細(xì)胞和正常組織進(jìn)行 DNA 水平和RNA 水平測(cè)序，利用自主搭建的高性能的專業(yè)生物信息分析流程鑒定出腫瘤組織內(nèi)具有主克隆優(yōu)勢(shì)的腫瘤基因組突變。
2）預(yù)測(cè)新生抗原：通過(guò)自主研發(fā)的抗原親和力預(yù)測(cè)軟件 PSSMHCpan 和 Mutilpan，以及抗原呈遞能力預(yù)測(cè)軟件 EPIP，篩選獲得新生抗原。
3）鑒定新生抗原：在蛋白水平上通過(guò)海量的腫瘤基因組突變數(shù)據(jù)庫(kù)和高敏感的的質(zhì)譜分析儀測(cè)定新抗原在腫瘤細(xì)胞表面的表達(dá)。運(yùn)用高效的體外細(xì)胞功能試驗(yàn)進(jìn)行驗(yàn)證，鑒定出具有免疫原性的腫瘤突變抗原肽，并應(yīng)用于特異性 T 細(xì)胞擴(kuò)增培養(yǎng)。
5. 國(guó)內(nèi)外開(kāi)展的臨床研究
在細(xì)胞制備過(guò)程中，利用全外顯子組鑒定腫瘤特異性變異和抗原，該生物信息方法在臨床中已經(jīng)使用過(guò)，而且相應(yīng)地進(jìn)行腫瘤特異性治療也取得了不錯(cuò)的療效，舉例如下。Rosenberg 在 2013 年報(bào)告過(guò)該方法，一例黑色素瘤患者進(jìn)行特異性細(xì)胞治療后截止報(bào)道經(jīng)歷了 7 年的完全緩解，并且在患者外周血中能持續(xù)監(jiān)測(cè)到特異性 T 細(xì)胞存在達(dá) 5 年之久；Rosenberg 在 2014 年的Science 雜志上也報(bào)告，應(yīng)用基因組測(cè)序技術(shù)與細(xì)胞免疫治療結(jié)合的方法治療腫瘤患者獲得了較好的臨床效果，其中一例膽管癌患者生存期超過(guò) 5年，體內(nèi)腫瘤病灶消失；2015 年的 Science 雜志也刊發(fā)了 3 個(gè)黑色素瘤患者進(jìn)行特異性細(xì)胞免疫治療，第 1例患者病情持續(xù)完全緩解，沒(méi)有出現(xiàn)復(fù)發(fā)或代謝性轉(zhuǎn)移；第 2 例患者接收治療后腫瘤組織縮減 30%并且沒(méi)有新發(fā)病灶，在后續(xù)治療中病情一直維持穩(wěn)定；第 3 例患者治療后病情持續(xù)穩(wěn)定，截止報(bào)道前沒(méi)有出現(xiàn)腫瘤組織增大。
2017 年，科學(xué)家 Patrick A. Ott 等在 Nature 雜志報(bào)道了他們開(kāi)發(fā)的基于每位受試者的腫瘤特有基因突變的個(gè)性化疫苗，在黑色素瘤受試者中取得了良好的效果。六位腫瘤已經(jīng)出現(xiàn)轉(zhuǎn)移的黑色素瘤受試者在接受治療 32 個(gè)月后，體內(nèi)均無(wú)腫瘤存在。這些疫苗在受試者體內(nèi)引起了強(qiáng)烈的 T 細(xì)胞免疫反應(yīng)，同時(shí)也沒(méi)有嚴(yán)重的副作用。在這個(gè)過(guò)程中，有兩位病情最嚴(yán)重的受試者出現(xiàn)過(guò)短暫的復(fù)發(fā)。后續(xù)給這兩位受試者使用了 PD-1 免疫檢查點(diǎn)抑制劑，體內(nèi)復(fù)發(fā)的腫瘤再次完全消失了?？茖W(xué)家 Ugur Sahin 等（2017 年）也在 Nature 雜志報(bào)道了開(kāi)發(fā)的一種基于 RNA 的癌癥新抗原疫苗。他們對(duì) 13 位晚期黑色素瘤受試者注射了針對(duì)包含 10 種新抗原的疫苗。在 26 個(gè)月后，其中 11 位受試者體內(nèi)沒(méi)有腫瘤跡象，這包括了 1 位出現(xiàn)短暫復(fù)發(fā)的受試者，同樣在接受了 PD-1 抑制劑后腫瘤再度消失。一年后，這兩個(gè)團(tuán)隊(duì)的癌癥疫苗又都在腫瘤突變負(fù)荷較低，的新抗原較少的膠質(zhì)母細(xì)胞瘤中獲得了成功。2020 年，美國(guó)的 Lakshmi Srinivasan 等人又在黑色素瘤、非小細(xì)胞肺癌和膀胱癌患者中聯(lián)合使用癌癥疫苗和 PD-1 抑制劑，獲得了持久的特異性抗腫瘤免疫反應(yīng)。
6. 目前 Neo-T 注射液臨床試驗(yàn)情況
目前，全球已經(jīng)有多家科技公司專注于 Neoantigen 技術(shù)的優(yōu)化并推進(jìn)臨床研究。我國(guó)華南地區(qū)最好的腫瘤醫(yī)院中山大學(xué)附屬腫瘤醫(yī)院與華大基因合作也正在開(kāi)展腫瘤新生抗原的臨床試驗(yàn)。通過(guò)對(duì)患者的腫瘤組織和血樣進(jìn)行測(cè)序，得到腫瘤特異性的異常蛋白，之后模擬這些異常蛋白被呈遞到細(xì)胞表面的過(guò)程，篩選出具有強(qiáng)親和力和高呈遞性的腫瘤新生抗原。然后利用這些新生抗原去刺激和擴(kuò)增從患者體內(nèi)分離的T 細(xì)胞，獲得靶向新生抗原的特異性 T 細(xì)胞（Neo-T 細(xì)胞）再回輸患者體內(nèi)，進(jìn)行腫瘤治療。在早期研究者發(fā)起的探索性臨床試驗(yàn)中，8 位晚期實(shí)體瘤患者接受了 Neo-T 注射液治療，其中 2 人評(píng)估部分緩解（PR），3 人疾病穩(wěn)定（SD），3 人疾病進(jìn)展，疾病控制率達(dá) 62.5%。而且試驗(yàn)中沒(méi)有出現(xiàn) 3~4 級(jí)的嚴(yán)重不良反應(yīng)，2 級(jí)不良反應(yīng)也只出現(xiàn)了 3 次。
目前，Neo-T 注射液臨床研究已獲得國(guó)家食品藥品監(jiān)督管理局批準(zhǔn)（受理批號(hào)： CXSL1900109）和醫(yī)院倫理委員會(huì)批準(zhǔn)，已于 2020.12.25 日在研究中心中山大學(xué)附屬腫瘤醫(yī)院?jiǎn)?dòng)，正在國(guó)內(nèi)開(kāi)展 I 期注冊(cè)臨床研究。中山大學(xué)附屬腫瘤醫(yī)院是位居中國(guó)前三甲的腫瘤中心，在新藥臨床研究和免疫細(xì)胞治療方面積累了豐富的經(jīng)驗(yàn)。華大基因是全球最大的基因組學(xué)研發(fā)機(jī)構(gòu)，憑借其在二代測(cè)序和生物信息學(xué)技術(shù)方面有著獨(dú)特優(yōu)勢(shì)，開(kāi)發(fā)出快速鑒定及驗(yàn)證腫瘤新生抗原的技術(shù)平臺(tái)和用腫瘤新生抗原誘導(dǎo)患者自體細(xì)胞毒性淋巴細(xì)胞的技術(shù)平臺(tái)。中山大學(xué)附屬腫瘤醫(yī)院和華大基因的合作為完成本項(xiàng)目提供了有力保障，為腫瘤患者打開(kāi)另一道希望之門(mén)。